| Summary: | Orientadora: Profa. Dra. Márcia Aparecida Sperança === Tese (doutorado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, São Bernardo do Campo, 2018. === A leishmaniose compreende um grupo de doenças zoonóticas causadas por protozoários da família Trypanosoma e do gênero Leishmania, sendo transmitida por vetores flebotomíneos. O género Leishmania compreende 30 espécies, incluindo 20 espécies capazes de causar doença em humanos, com diferentes manifestações clínicas, que vão desde lesões assintomáticas, cutânea e mucocutânea, até a forma visceral grave, que é letal se não tratada. No continente americano, a leishmaniose visceral (LV) é causada por Leishmania infantum chagasi e o Brasil concentra 90% dos casos registrados na América Latina. O diagnóstico da LV na América apresenta dificuldades devido a reações cruzadas com outras tripanossomíases endêmicas. Além disso, os sinais clínicos e as alterações hematológias da LV são encontrados em outras doenças infecciosas e em alterações malignas hematológicas. Com o intuito de buscar ferramentas e estratégias para o diagnóstico diferencial da LV, neste trabalho foram desenvolvidos métodos de isolamento e detecção molecular de L. infantum chagasi, além da busca por características demográficas específicas e avaliação do diagnóstico diferencial da LV em aspirados de medula óssea de pacientes com sintomas de doença hematológica da região de Marília-SP, no período de 2010 a 2017. O método de isolamento de L. infantum chagasi foi realizado a partir de amostras de medula óssea e sangue periférico de indivíduos sintomáticos. O diagnóstico molecular por reação em cadeia da polimerase, convencional, foi desenvolvido utilizando como alvo o gene de cópia única que codifica a enzima quitinase de L. infantum, o qual permite o diagnóstico específico e direto a partir de diferentes amostras clínicas. Os testes apresentaram elevada especificidade e mostraram sensibilidade aumentada quando comparados com métodos utilizados rotineiramente nos serviços de saúde. Os resultados da análise demográfica e do diagnóstico diferencial a partir de aspirados de medula óssea de pacientes com suspeita de doenças hematológicas indicaram que 19,4% apresentaram LV, e que a população com maior risco possui menos de 20 anos. O estudo realizado demonstra que a investigação de LV em pacientes com alterações hematológicas é fundamental não só para identificar casos de LV, mas também para tratar corretamente os casos de doenças infecciosas e hematológicas associadas. === Leishmaniasis covers a group of zoonotic diseases caused by protozoa parasites of the Trypanosoma Family and the genus Leishmania, being transmitted by phlebotomine insect vectors. The genus Leishmania comprises 30 species, including 20 species capable of causing disease in humans, with different clinical manifestations, ranging from asymptomatic, cutaneous and mucocutaneous lesions, to severe visceral form, which is lethal if untreated. In the American continent, visceral leishmaniasis (VL) is caused by Leishmania infantum chagasi and Brazil accounts for 90% of the Latin America registered cases. The diagnosis of VL in America presents difficulties due to cross-reactions with other endemic trypanosomiasis. In addition, clinical signs and VL hematological alterations are found in other infectious diseases and hematological malignancies. In order to search for tools and strategies for the differential VL diagnosis, in this work we have developed methods of isolation and molecular detection of L. infantum chagasi, as well as the search for specific demographic characteristics and evaluation of the differential diagnosis of VL in bone marrow biopsies of patients with symptoms of haematological diseases in the region of Marília-SP, from 2010 to 2017. The method of L. infantum chagasi isolation was performed from samples of bone marrow and peripheral blood of symptomatic individuals. Conventional polymerase chain reaction (PCR) was developed using the single copy gene encoding the chitinase enzyme of L. infantum, which allows specific and direct diagnosis from different clinical samples. Both diagnostic tests showed high specificity and increased sensitivity when compared with routinely used methods in health services. The results of the demographic analysis and the differential diagnosis from bone marrow biopsy of patients with supposed hematological diseases indicated that 19.4% had VL, and that the population with the highest risk is less than 20 years old. The present study demonstrates that the investigation of VL in patients with hematological alterations is fundamental not only to identify cases of VL but also to correctly treat cases of VL associated infectious and hematological diseases.
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