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Tese_Med_ Kiyoshi Ferreira Fukutani.pdf: 4159106 bytes, checksum: ca6c9303a7e5ece45bdabcb3ca7d843b (MD5) === CNPq;FAPESB;CAPES; === Introdução: Infecções respiratórias agudas (IRA) apresentam uma elevada
morbidade e representam um problema de saúde pública. Objetivos: Detectar , via a
presença de RNA, os agentes virais e bacterianos presentes em aspirado nasofaríngeo
(ANF) de crianças com idades entre 6-23 meses, portadoras de IRA e detectar o
perfil de resposta imune associados. Metodologia: ANF foram submetidos à extração
de RNA e esse foi utilizado em ensaios de nCounter empregando sondas desenhadas
para a detecção viral e bacteriana e empregando sondas padrão para a detecção da
resposta imune. Resultados: na coorte de 60 ANFs obtidos de crianças com IRA,
detectamos transcritos de Parainfluenza (1-3), Vírus Sincicial Respiratório (A e B)
(21%), Metapneumovirus humanos (5%), Bocavírus, Coronavírus e Vírus Influenza
A (3%), Rinovírus (2%), Staphylococcus aureus (77%), Haemophilusinfluenzae
(69%), Streptococcuspneumoniae (26%), Moraxellacatarrhalis (8%),
Mycoplasmapneumoniae (3%) e Chlamydophilapneumoniae (2%). Dentre os 60
pacientes, 28 apresentaram infecção bacteriana única, 22 pacientes apresentaram a
presença de bactérias e vírus, e cinco pacientes apresentaram infecção viral apenas.
Em cinco pacientes, a detecção dos transcritos ficou abaixo do ponto de corte e esses
foram considerados negativos. Também observamos uma modulação diferencial de
genes imunes em ANFs; o número de genes modulados foi reduzido por redução de
dimensões. Encontramos 30 genes diferencialmente expressos. Para avaliar as
associações entre todas as variáveis, utilizamos a rede Bayesiana e observamos uma
associação entre marcadores da resposta imune com carga microbiana. Conclusão: O
nCounter é uma técnica sensível para identificar o transcriptoma de ANF, tendo como
alvo tanto a resposta imune quanto os patógenos. A análise integrada dos dados revelou um subconjunto de genes relacionados à resposta que interagem diretamente
com a carga microbiana e com os sintomas clínicos.
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