| Summary: | Espécies reativas de oxigênio (ERO) produzidas por neutrófilos através do complexo Nox2
estão diretamente associadas às ações deletérias surgidas quando a inflamação escapa do
controle da homeostase. A produção exacerbada destas espécies é controlada por ações de
antioxidantes endógenos como a glutationa (GSH), um importante tripeptídeo redutor que
repara biomoléculas oxidadas envolvidas na sinalização celular e atua como “scavenger” de
bioradicais. Os nitróxidos são radicais livres, sintéticos e estáveis que apresentam
propriedades antioxidantes e antiinflamatórias. Recentemente foi demonstrado que estes são
capazes de modular o “burst” respiratório de macrófagos, reduzindo a produção de ânions
superóxido (O2•-) gerados pelo complexo Nox2, em um mecanismo no qual atuariam como
“scavengers” de radicais tiila (RS•.), alterando modificações proteicas pós-traducionais. O
presente trabalho teve como objetivo avaliar a capacidade dos nitróxidos 4-9((-
acridinecarbonil)-amino)-2,2,6,6-tetrametilpiperidina-1-oxil (Ac-Tempo) e 2,2,6,6-
tetrametilpiperidina-1-oxil (Tempo) de interagir e indisponibilizar RS•, especialmente
glutationila (GS•), modulando a produção de ERO/ERN por neutrófilos inflamatórios
isolados da cavidade peritoneal. O “burst” respiratório de neutrófilos estimulados com forbol
12-miristato 13- acetato (PMA) foi monitorado através de técnicas espectrofotométricas e a
capacidade de interação entre RS• e nitróxidos foi analisada através de ensaios de Ressonância
Paraeletromagnética (EPR) e Espectrometria de Fluorescência. Para confirmar a produção de
RS• durante a ativação do complexo Nox2, utilizou-se o agente captador de spin, 5,5-
dimetilpirrolina-N-oxido (DMPO) e o sinal de EPR característico do aduto DMPO/GS• foi
monitorado. Verificou-se um aumento da resposta de fluorescência, acompanhado pela
redução do sinal de EPR do nitróxido em células estimuladas com PMA. Com a finalidade de
verificar alterações proteicas pós-traducionais de S-glutationilação os grupos experimentais
foram submetidos à técnica de “dot blotting” e o tratamento celular com o nitróxido Tempo
100 μM determinou uma diminuição do processo de S-glutationilação proteica associado à
atividade do complexo Nox2. Os resultados apontam os nitróxidos como protótipos de
antioxidantes e antiinflamatórios. === Reactive oxygen species (ROS), produced in neutrophils, through the Nox2 complex are
directly associated with the deleterious actions that arise when inflammation escapes from the
control of organic homeostasis. An exacerbated production of these species is controlled by
endogenous antioxidants such as glutathione (GSH), an important tripeptide able to repair
oxidized biomolecules involved in cell signaling and to act as a scavenger of bioradicals. The
nitroxides are synthetic and stable free radicals which have been frequently reported because
of their anti-inflammatory and antioxidant properties. Recently, it was shown that these
compounds can modulate neutrophil respiratory burst, reducing the production of superoxide
anion generated by the Nox2 complex in a mechanism were they act as scavenger of thiyl
radicals (RS•), altering post-translational modification of proteins. The aim of this work was
to evaluate the ability of nitroxides 2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl (TEMPO) and 4-(9-
acridinecarbonylamino)-2,2,6,6-tetramethylpiperidine-1-oxyl (Ac-Tempo) to interact with
thiyl radicals, especially glutathionyl (GS•), minimizing the production of reactive oxygen and
nitrogen species by inflammatory neutrophils isolated from the peritoneal cavity of mice. The
respiratory burst in neutrophils stimulated by phorbol 12-myristate 13- acetate (PMA) was
monitored spectrophotometrically and the interaction between thiyl radicals and nitroxides
was analyzed by Electron Paramagnetic Resonance (EPR) and Fluorescence Spectroscopy. To
confirm the production of RS• during the activation of the Nox2 complex, the spin trap for
GS•, 5,5-dimethylpyrroline-N-oxide (DMPO) was used and the characteristic DMPO/GS•
adduct EPR signal was monitored. An increase in the fluorescence response was observed,
accompanied by a reduction of EPR signal of nitroxide in cells stimulated with PMA. Posttranslational
events such as S-glutathionylation were analyzed through dot blotting and the
experimental groups treated with Tempo (100 μM) showed a decrease in the process of Sglutathionylation
associated with the activity of the Nox2 complex. These results suggest that
thiyl radicals play a role in the maintenance of the neutrophil respiratory burst and may
provide a therapeutic target for inflammation management. === Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES
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