| Summary: | O objetivo deste trabalho foi isolar proantocianidinas de folhas de barbatimão e avaliar a
atividade citotóxica para células de tumor mamário humano, MCF-7 (ER+) e MDA-MB-435
(ER-). As proantocianidinas foram isoladas da fração aquosa de folhas de barbatimão,
utilizando-se cromatografia em coluna de Sephadex LH-20 e metanol (10-100% ) e acetona
(70%) como eluentes. A presença de proantocianidinas, nas frações obtidas, foi monitorada
por cromatografia de camada delgada e esta revelou que a fração eluída com metanol 100%
(usada nos experimentos) apresentou o maior teor de proantocianidinas. A despolimerização
ácida permitiu quantificar as procianidinas na amostra e a análise por HPLC revelou a
presença de ácido gálico, procianidina dimérica B1 e (-)-epicatequina-3-O-galato. A fração
apresentou atividade antioxidante, sendo que a capacidade antioxidante total foi de 470,28 ±
14,36 mg ácido ascórbico/g de fração. A atividade seqüestrante de radicais livres DPPH 50%
foi de 12 μg/mL e a atividade inibidora máxima da oxidação de proteínas foi obtida com 50
μg/mL de fração. A fração apresentou atividade citotóxica para células de tumor mamário
MCF-7 e MDA-MB-435. O tratamento das células com a fração aumentou a atividade
redutora de MTT, o que indica aumento da viabilidade celular. Entretanto, a análise
morfológica revelou intensa vacuolização citoplasmática dependente da concentração da
fração. Os vacúolos acumularam MTT, indicando tratarem-se de vacúolos autofágicos. Outras
alterações morfológicas observadas com o tratamento foram a perda da morfologia celular
típica, condensação da cromatina (principalmente formação de núcleo picnótico), alterações
na membrana plasmática e após 48 h de tratamento houve marcante diminuição do tamanho
das células. Não foi observado o padrão de DNA escada característico de apoptose nos
diversos tratamentos. Os resultados parecem indicar que a fração isolada pode induzir
autofagia nos dois tipos celulares estudados. A autofagia pode potencializar os efeitos
antitumorais de quimioterápicos, o que pode ser útil na terapia contra o câncer e as folhas de
barbatimão parecem ser uma valiosa fonte de substâncias bioativas. === The aim of the present study was to isolate proanthocyanidins from barbatimão leaves and
evaluate its cytotoxic activity to MCF-7 (ER+) e MDA-MB-435 (ER-) cells. The
proanthocyanidins were isolated from the aqueous fraction of barbatimão leaves using
Sephadex LH-20 column chromatography and methanol (10-100%) and acetone (70%) as
eluents. The proanthocyanidins presence in the obtained fractions was monitored by thin layer
chromatography and it revealed that the methanol 100% eluted fraction (used in the
experiments) exhibited the highest content of proanthocyanidins. The acid depolimerization
allowed quantifying the procyanidins in the sample and the HPLC analysis revealed the
presence of gallic acid, procyanidin dimmer B1 and (-)-epicatechin-3-O-gallate. The fraction
exhibited antioxidant activity, being the total antioxidant capacity 470.28 ± 14.36 mg ascorbic
acid/g of fraction. The 50%DPPH free radical scavenging activity was obtained with 12 μg/ml
and the maximum protein oxidation inhibitory activity was achieved with 50 μg/ml fraction.
The fraction was cytotoxic to breast cancer MCF-7 and MDA-MB-435 cells. Cell fraction
treatment enhanced the reducing MTT activity that indicates increased cell viability.
However, the morphological analysis showed intense cytoplasmic vacuolization in a dosedependent
manner. The vacuoles accumulated MTT, which seems to be consistent with
autophagic vacuoles. Other morphological changes observed after cell treatment include cell
lost of typical morphology, chromatin condensation (mainly pyknosis), membrane blebbing
and after 48 h-treatment there was prominently cell shrinkage. No DNA-laddering formation,
typical of apoptosis, was obtained after cell treatment. The results seem to indicate that the
isolated fraction could induce autophagy in both studied breast cancer cell lines. Autophagy
could enhance the effects of antitumor chemotherapy that can be useful in anti-cancer therapy and barbatimão leaf seems to be a valuable source of bioactive substances.
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