Développement de la technologie des récepteurs couplés à un canal ionique pour des études structure-fonction des récepteurs couplés aux protéines G et du canal Kir6.2

• Main Author: Niescierowicz, Katarzyna
• Language: fra
• Published: Université de Grenoble 2013
• Subjects: [SDV:SA] Life Sciences/Agricultural sciences; [SDV:SA] Sciences du Vivant/Sciences agricoles; GPCR; Canal KATP; Biocapteur; Électrophysiologie (patch-clamp); Double micro-électrodes); Ingénierie moléculaire
• Online Access: http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01067669; http://tel.archives-ouvertes.fr/docs/01/06/76/69/PDF/pdf2star-1392030415-35976_NIESCIEROWICZ_2013_archivage.pdf

Les Récepteurs Couplés à un Canal Ionique (ICCRs) sont des canaux ioniques artificielscréés par fusion d'un Récepteur Couplé aux Protéines G (RCPG) au canal ionique Kir6.2. Dansce concept, le canal agit comme un rapporteur direct des changements conformationnels desRCPGs permettant de détecter par simple mesure de courant, la fixation d'agonistes etd'antagonistes proportionnellement à leur concentration.Le signal induit étant directement corrélé à l'activité du récepteur, indépendamment desvoies de signalisation des protéines G, nous avons exploité cet avantage pour étendre le champd'applications des ICCRs au cours de cette thèse. Nous avons développé quatre applications quisont: 1) la caractérisation fonctionnelle des RCPG optimisés pour la cristallisation par insertionde domaine du lysozyme du phage T4 dans la boucle ICL3; 2) la détection de la dépendance desRCPGs au cholestérol; 3) la détection de ligands dits "biaisés" pour faciliter leur criblage; et 4) lacartographie fonctionnelle des portes du canal Kir6.2 régulées par des protéines membranairesinteragissant par le domaine N-terminal.