Caracterisation fonctionnelle des sortases de lactococcus lactis : de l'ancrage de protéines à la biogénèse de pili

• Main Author: Oxaran david, Virginie
• Language: fra
• Published: Université Paris Sud - Paris XI 2012
• Subjects: [SDV:SA] Life Sciences/Agricultural sciences; [SDV:SA] Sciences du Vivant/Sciences agricoles; Lactococcus lactis; Sortase; Pili; Biofilm; Agrégation; Adhésion; Mucine
• Online Access: http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01053734; http://tel.archives-ouvertes.fr/docs/01/05/37/34/PDF/VD2_OXARAN_VIRGINIE_19012012.pdf

Les bactéries lactiques (BL), communément employées en industrie agroalimentaire, font à présent l'objet d'études visant à les utiliser pour de nouvelles applications telles que le développement de vaccins vivants ou la délivrance de molécules d'intérêt biothérapeutique chez l'hôte. Dans cette optique, différents systèmes de présentation de protéines à la surface des bactéries à Gram positif ont été développés. L'un d'entre eux est basé sur l'activité d'enzymes, les sortases, liant de façon covalente les protéines à la paroi bactérienne. Nous avons utilisé la BL modèle, Lactococcus lactis, afin d'étudier les sortases, jusqu'alors étudiées essentiellement chez les bactéries pathogènes. La sortase A (SrtA) est responsable de l'ancrage d'au moins cinq protéines à motif LPxTG à la surface. Une seconde sortase, de classe C (SrtC), a été identifiée et caractérisée. Nous avons mis en évidence la capacité de L. lactis à produire des pili à sa surface qui sont polymérisés par SrtC et ancrés à la paroi par SrtA. Ces pili résultent de la polymérisation de la piline majeure YhgE qui peut être surplombée par la piline mineure de coiffe YhgD. La production de pili chez L. lactis entraîne un changement de comportement des cellules résultant à des phénotypes particuliers. Nous avons pu l'associer à l'auto-agrégation des cellules en culture liquide, à la formation de biofilms hétérogènes et aériens, et à l'adhésion à la mucine gastrique de porc. Plus précisément, YhgE a été impliquée dans l'auto-agrégation et les biofilms atypiques, et une troisième piline, dont l'appartenance au pilus n'a pas été démontrée, semble aussi impliquée dans la production de biofilms atypiques.