Etude des fonctions des protéines virales de la famille EBNA3 dans l'immortalisation des lymphocytes B par le virus d'Epstein-Barr : rôle fonctionnel de l'interaction entre EBNA-3A et la protéine cellulaire Miz-1

• Main Author: Bazot, Quentin
• Language: FRE
• Published: Ecole normale supérieure de lyon - ENS LYON 2012
• Subjects: [SDV:SA] Life Sciences/Agricultural sciences; [SDV:SA] Sciences du Vivant/Sciences agricoles; Virus d'Epstein-Barr (EBV); Cycle cellulaire; Protéines EBNA3; EBNA-3A; Miz-1
• Online Access: http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00923179; http://tel.archives-ouvertes.fr/docs/00/92/31/79/PDF/BAZOT_Quentin_2012_These_-_.pdf

Le virus d'Epstein-Barr (EBV) est un gamma-Herpesvirus associé à de nombreux cancers chez l'homme. In vitro, l'infection de lymphocytes B primaires par EBV conduit à leur immortalisation (genèse de lignées lymphoblastoides (LCL)). Dans ces cellules, seules 9 protéines virales (protéines dites de latence) sont exprimées et coopèrent pour stimuler la prolifération des cellules. Afin de comprendre les mécanismes moléculaires par lesquels les 3 protéines de latence de la famille EBNA3 (-3A, -3B et -3C) participent à l'induction et au maintien de la prolifération cellulaire induite par EBV, nous avons réalisé un crible deux-hybrides dans la levure en utilisant EBNA-3A, -3B ou -3C comme appâts. Ce crible nous a permis d'identifier de nombreux nouveaux partenaires particulièrement pertinents au vu de ce que l'on connaît des rôles respectifs des protéines EBNA3. Parmi les nouveaux partenaires de la protéine EBNA-3A se trouve le facteur de transcription Miz-1 qui est connu pour jouer un rôle clef dans l'arrêt du cycle cellulaire en transactivant l'expression de gènes tels CDKN1A, CDKN1C et CDKN2B. Nous avons validé cette interaction par GST-pull down ainsi que par co-immunoprécipitation en cellules humaines. Nous avons ensuite étudié l'effet de la protéine virale EBNA-3A sur l'activation de la transcription induite par Miz-1. Pour cela, nous avons comparé le niveau des transcrits de certains gènes cibles de Miz-1 dans des LCL exprimant ou non EBNA-3A et avons trouvé que certains gènes codant des inhibiteurs du cycle cellulaire sont différemment exprimés en présence d'EBNA-3A. Enfin, nous avons pu montrer que la protéine virale EBNA-3A est capable de réprimer l'activation de la transcription de Miz-1 en inhibant le recrutement de l'une de ses protéines co-activatrices, la protéine NPM. Ces résultats permettent de mieux comprendre les mécanismes par lesquels les protéines EBNA3 et plus largement EBV, dérégulent le cycle cellulaire.