DECOUVERTE ET CARACTERISATION PHARMACOLOGIQUE DE NOUVEAUX ANTAGONISTES DU RECEPTEUR SMOOTHENED : LES COMPOSES MRT

• Main Author: Roudaut, Hermine
• Language: FRE
• Published: Université Paris Sud - Paris XI 2011
• Subjects: [SDV:NEU] Life Sciences/Neurons and Cognition; Smoothened; antagoniste; modèle pharmacophorique; site de liaison; cil primaire
• Online Access: http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00638720; http://tel.archives-ouvertes.fr/docs/00/63/87/20/PDF/THESEFINALE101011.pdf

La voie de signalisation Sonic Hedgehog (Shh) joue un rôle fondamental au cours de l'embryogenèse pour la mise en place de nombreux tissus. Elle persiste à l'âge adulte et régulerait notamment le contrôle de fonctions cérébrales. Son activation requiert la liaison d'un peptide Shh sur le récepteur Patched (Ptc) qui réprime l'activité constitutive de Smoothened (Smo), un récepteur apparenté à la famille des récepteurs couplés aux protéines G (RCPG). Récemment, des essais cliniques pour le traitement de médulloblastomes et de diverses tumeurs solides chez l'Homme ont été menés avec des antagonistes de Smo. Cependant, ces molécules ont révélé des limitations à leur utilisation puisque des résistances au traitement sont apparues. Le travail de cette thèse a conduit au développement d'un modèle pharmacophorique des antagonistes de Smo qui a ensuite permis le criblage virtuel d'une banque de molécules et l'identification de nouvelles familles d'antagonistes de Smo. L'acylthiourée MRT-10 et l'acylurée MRT-14 ont été les deux premiers composés caractérisés. Des études de relations structure-activité ont permis l'identification d'une nouvelle famille d'inhibiteurs du récepteur Smo de haute affinité à laquelle l'acylguanidine MRT-83 appartient. Ce composé s'adapte parfaitement au modèle pharmacophorique des antagonistes de Smo. Les modifications structurales que MRT-83 présentes en comparaison avec les deux têtes de séries précédemment caractérisées sont à l'origine du gain d'activité de MRT-83 sur de nombreux tests cellulaires mettant en jeu l'activation de la voie Shh. Le composé MRT-83 inhibe la liaison de la BODIPY-cyclopamine sur le récepteur Smo humain et bloque la prolifération des précurseurs des cellules granulaires de rat avec une affinité de l'ordre du nanomolaire, comparable à celle des antagonistes de référence de Smo tels que le GDC-0449 et le LDE-225. Malgré l'homologie de séquence entre Smo et la famille des récepteurs Frizzled impliqués dans la signalisation Wnt, le composé MRT-83 ne présente aucun effet sur la voie Wnt. MRT-83 bloque la translocation de Smo dans le cil primaire induite par l'activation de la voie Shh dans les cellules NT2, une lignée issue d'un tératocarcinome humain, contrairement à l'antagoniste de Smo de référence, la cyclopamine qui induit l'adressage du récepteur dans le cil primaire. L'injection stéréotaxique dans le ventricule latéral de cerveau de souris adulte de MRT-83, contrairement à celle d'un composé de structure analogue, dépourvu d'activité sur Smo, inhibe l'expression des transcrits de Ptc induite par l'injection de Shh dans la zone sous-ventriculaire, l'une des deux principales aires de neurogenèse adulte. Ces résultats démontrent que les dérivés MRT bloquent également la signalisation Shh in vivo. Ainsi, les composés MRT-10, MRT-14, MRT-83 et les molécules de structure analogues caractérisées sont de puissants antagonistes de Smo. Ces molécules constituent de nouveaux outils pharmacologiques qui pourraient permettre d'améliorer notre compréhension des mécanismes moléculaires et biochimiques régulant la signalisation Hh et permettre le développement de nouvelles molécules en clinique pour le traitement des tumeurs Hh- dépendantes.