Complementarité des protéines de detoxication et trafic intracellulaire

• Main Author: Cavelier, Adeline
• Language: FRE
• Published: Université René Descartes - Paris V 2007
• Subjects: [SDV] Life Sciences; Cytochrome P450 3A P-glycoprotéine Microscopie à épifluorescence Coupes de foie Hépatocytes Fibroblastes D/ADX Résorufine Vérapamil bodipy
• Online Access: http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00553511; http://tel.archives-ouvertes.fr/docs/00/55/35/11/PDF/These_Cavellier_Adeline_2007_CEA-iBiTecs.pdf

La coopération fonctionnelle entre le cytochrome P450 3A (CYP3A) et la P-glycoprotéine (P-gp) décrite dans la littérature est un facteur déterminant contribuant à la variabilité de la biodisponibilité de la plupart des médicaments administrés per os. Le CYP3A et la P-gp sont des protéines membranaires dont les localisations respectives communément attribuées sont la membrane du réticulum endoplasmique pour le CYP3A et la membrane plasmique pour la P-gp. Le but de notre étude était une description intégrée au niveau cellulaire du fonctionnement de ces protéines membranaires de détoxication des médicaments et de leurs métabolites, grâce à la détermination de la localisation cellulaire de ces protéines par immunomarquage et par suivi fonctionnel de composés fluorescents, à l'aide de techniques de microscopie à épifluorescence. Le matériel utilisé comprenait des coupes de foie de rat et humain, des hépatocytes en culture primaire ou des lignées cellulaires de fibroblastes de Hamster chinois D/ADX surexprimant la P-gp. Nous avons ainsi démontré que le CYP3A se localise exclusivement au niveau du réticulum endoplasmique, alors que la P-gp est retrouvée au pôle apical des hépatocytes, au niveau des canalicules biliaires et sur la membrane plasmique des fibroblastes. Une colocalisation membranaire des composés et enzymes, synonyme d'une grande efficacité de détoxication, n'a pas été mise en évidence dans les hépatocytes, à cause de difficultés techniques et d'une trop faible fluorescence des substrats utilisés.