Analyse de l'activation du facteur oedémateux de Bacillus anthracis par la calmoduline, en vue de la recherche d'inhibiteurs

• Main Author: Laine, Elodie
• Language: FRE
• Published: Université Pierre et Marie Curie - Paris VI 2009
• Subjects: [SDV:SP:MED] Life Sciences/Pharmaceutical sciences/Medication; Bacillus anthracis; facteur oedémateux; calmoduline; calcium; dynamique moléculaire; détermination de chemin de réaction; recherche rationnelle d'inhibiteurs; allostérie
• Online Access: http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00483602; http://tel.archives-ouvertes.fr/docs/00/48/36/02/PDF/2009-Elodie_Laine.pdf; http://tel.archives-ouvertes.fr/docs/00/48/36/02/ANNEX/2009-Elodie_Laine.pptx

La virulence de la bactérie Gram+ Bacillus anthracis, responsable de la maladie du charbon, est due à la présence d'une capsule et deux toxines. Chaque toxine résulte de l'assemblage de l'antigène protecteur (PA) avec l'un des deux facteurs, létal (LF) ou oedémateux (EF), dans le cytoplasme de la cellule hôte. EF est une adénylyl cyclase, qui transforme l'ATP en AMPc de manière incontrôlée, provoquant des dérèglements cellulaires. Elle est activée par la calmoduline (CaM), impliquée dans de nombreuses voies de signalisation du calcium. Des structures cristallographiques et une étude par RMN ont montré que la stabilité du complexe EF-CaM dépend du niveau de calcium fixé à CAM. Des simulations de dynamique moléculaire du complexe, avec 0, 2 ou 4 ions calcium, ont permis de caractériser l'effet du calcium sur la plasticité conformationnelle des deux partenaires et de proposer un modèle de l'interaction EF-CaM. L'analyse conjointe des corrélations dynamiques et des influences énergétiques a fait émerger le concept de connexité du réseau de résidus comme critère de stabilité. La large transition conformationnelle induite chez EF par la fixation de CaM a été décrite, grâce à la détermination d'un chemin de réaction plausible, par modélisation moléculaire. Les conformations intermédiaires obtenues ont servi à guider la recherche rationnelle d'inhibiteurs de la toxine EF, dans le cadre d'une approche combinant méthodes computationnelles et expérimentales. Une stratégie innovante, impliquant le criblage virtuel d'une poche allostérique plutôt que du site catalytique de l'enzyme, a identifié six molécules actives, inhibant totalement l'activité de EF à des concentrations de 10-100 microM.