Un microlaboratoire électrophorétique pour l'étude<br />du couplage entre transport et cinétique chimique :<br />application à la réaction d'hybridation d'oligonucléotides

• Main Author: Estévez-Torres, André
• Language: FRE
• Published: Université Pierre et Marie Curie - Paris VI 2007
• Subjects: [CHIM:OTHE] Chemical Sciences/Other; [PHYS:PHYS:PHYS_BIO-PH] Physics/Physics/Biological Physics; oligonucléotide; microfluidique; PDMS; hybridation; diffusion; cinétique
• Online Access: http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00153416; http://tel.archives-ouvertes.fr/docs/00/16/17/86/PDF/EstevezTorres-these.pdf; http://tel.archives-ouvertes.fr/docs/00/16/17/86/ANNEX/soutenance_these.pdf

Nous avons développé un microlaboratoire pour étudier la diffusion et son couplage<br />avec la réaction chimique. Il est constitué d'une chambre d'analyse dans laquelle on peut<br />appliquer des champs électriques en deux dimensions pour obtenir des profils de concentration<br />stationnaires ou non-stationnaires. La simplicité spatiale du flux électrophorétique<br />utilisé permet d'appliquer systématiquement une analyse dans l'espace de Fourier. Ce traitement<br />fournit le coefficient de diffusion d'un analyte pur ainsi que la constante thermodynamique<br />et les constantes cinétiques d'un mélange réactif. Dans le but de développer des<br />techniques de séparation resposant sur la cinétique, nous avons étudié la réaction d'hybridation<br />entre deux brins d'ADN et constitué une banque d'oligonucléotides avec des<br />constantes cinétiques variées. Ces études nous ont mené à developper, en collaboration<br />avec le Museum National d'Histoire Naturelle, une sonde oligonucléotidique fluorescente à<br />motif quadruplex permettant une discrimination cinétique lorsqu'elle s'hybride avec une<br />séquence parfaitement complémentaire ou mésappariée.