Incorporación química de la sonda fluorescente FlAsH en la proteína Hha: aplicación al estudio del complejo Hha/H-NS

• Main Authors: Catalina Granados Acevedo, Tiago Cordeiro, Miquel Pons
• Format: Article
• Language: English
• Published: Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca 2009-06-01
• Series: NOVA
• Subjects: Anisotropía de fluorescencia; FlAsH; Hha; H-NS; Poteínas asociadas al nucleoide; Sonda molecular
• Online Access: https://revistas.unicolmayor.edu.co/index.php/nova/article/view/123
• ISSN: 1794-2470; 2462-9448

El objetivo de esta investigación fue realizar estudios de incorporación de la sonda FlAsH como posible herramienta para el estudio in vitro e in vivo de la proteína Hha y de su interacción con H-NS. Se construyó una proteína con la secuencia específica “CCPGCC” capaz de unir la sonda fluorescente FlAsH; posteriormente se desarrollaron procesos de transformación, expresión y purificación, con los cuales se evidenció que a pesar de introducir una secuencia adicional no nativa a la proteína, se pudo obtener proteína en buena cantidad, estabilidad, rendimiento y con un alto nivel de pureza. La optimización del protocolo de incorporación del FlAsH se hizo teniendo en cuenta el rendimiento y el tiempo de reacción. El complejo FlAsH/HhaCCPGCC se caracterizó mediante fluorescencia y se comprobó mediante MALDI TOF. La incorporación HhaCCPGCC1/ FlAsH no se obtuvo en un alto porcentaje como se esperaba, por esta razón no se pudieron hacer los estudios de interacción entre el complejo de proteínas Hha y H-NS.