Просте методичне пристосування для мікроін'єкторних маніпуляцій і вимірювань на електроморфологічному чипі при мікроінтерферометричному контролі інтерфейсних і мембранних процесів на діапазоні товщини від 50 до 10000 ангстрем під різними кутами

• Main Authors: О. В. Градов, Ф. А. Насиров, А. А. Скрынник, А. Г. Яблоков
• Format: Article
• Language: Russian
• Published: Ministry of Health of Ukraine. Dnipropetrovsk Medical Academy 2017-12-01
• Series: Морфологія
• Subjects: мікроелектроди; мікроінтерферометр; мікроперфузія; патч-кламп; мікроманіпуляція; перфузія одиночних клітин; цитоелектрофізіологічний чіп
• Online Access: http://morphology.dma.dp.ua/article/view/129196

Мікроманіпуляції, перфузії і вимірювання, що проводяться з використанням скляних мікроелектродів, заповнених, як правило, електролітом, є класичною технікою експериментально-морфологічних і мембранно-електрофізіологічних досліджень на рівні окремих клітин і мембранних поверхонь. Стандартний (ефективний) діаметр скляного мікроелектрода в кінцевій області становить від 500 нм до менш ніж 100 нм, що перешкоджає використанню стандартних оптичних мікроскопів для його спостереження, відповідно до оптичних критеріїв (критерій Релєя і т.п.), оскільки при діаметрі конуса менше 500 нм він губиться в інтерференційної облямівці. Мікропроцесорним програмуванням пуллера (мікрокузні), що забезпечує витягування і розрив, хоча і можна досягти в відомих режимах заданих форм і діаметра кінця мікропіпеток, цей результат не є в повній мірі контрольованим в силу вищевказаних обмежень. У зв'язку з цим необхідне створення пристроїв контролю кінцевого фрагмента мікропіпеток як при отриманні, так і при експлуатації (внутрішньоклітинному або екстрацелюлярному введенні) в штатному режимі. При цьому необхідно, щоб даний метод дозволяв візуалізувати на зображенні клітини з мікроелектродами в реальному часі процеси, що відбуваються між ними, в залежності від типу і стану електрода, що дозволить нівелювати артефакти, з частотою систематичної помилки, що виникають при неконтрольованій експлуатації кінця мікропіпеток після застосування різних способів заливки електроліту (капілярного по Тасакі; вакуумного заповнення; заповнення спиртом з подальшим витісненням спирту по еквівалентній об'ємній характеристиці електролітом; заливка легкоплавкими сплавами як альтернатива рідким електролітам, що полегшує введення контакту хлорсрібного дроту). Нами пропонується конфігурація установки, що вирішує всі вищевказані проблеми шляхом введення інтерферометричного пристрою для мікроскопічного контролю мікроелектродів і мікроманіпулятора або мікроперфузора, вперше для даного типу оптичних приладів комбінованого з інтерферометричною оптичною схемою.