Jacaratia corumbensis O. Kuntze a new vegetable source for milk-clotting enzymes

• Main Authors: Ana Rodrigues Duarte, Débora Maria Rodrigues Duarte, Keila Aparecida Moreira, Maria Taciana Holanda Cavalcanti, José Luiz de Lima-Filho, Ana Lúcia Figueiredo Porto
• Format: Article
• Language: English
• Published: Instituto de Tecnologia do Paraná (Tecpar) 2009-02-01
• Series: Brazilian Archives of Biology and Technology
• Subjects: Jacaratia corumbensis O. kuntze; Milk clotting enzyme; Characterization; Purification; Vegetable enzyme
• Online Access: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1516-89132009000100001
• ISSN: 1516-8913; 1678-4324

The partial characterization and purification of milk clotting enzyme obtained from the (root latex) of Jacaratia corumbensis O. kuntze was studied, by fractional precipitation with ammonium sulphate and ion exchange chromatography. The ammonium sulphate precipitate showed five fractions (AS1- 0-20%; AS2 - 20-40%; AS3 - 40-60%; AS4 - 60-80%; AS5 - 80-100%) and among the fractions obtained, the 40-60% fraction (AS3) showed the highest milk clotting activity with a purification factor of 1.2 fold in relation to the crude extract. This fraction when applied on Mono Q column yielded two protein peaks (p1 and p2), but p1 pool showed the best milk-clotting activity. The optimal pH for the crude and partially purified extract was 6.5 and 7.0, respectively. The maximum milk-clotting activity was at 55ºC for the both crude and partially purified extracts. The enzyme was inhibited by iodoacetic acid which suggested that this enzyme was a cysteine protease, with molecular weight of 33 kDa.<br>A enzima coagulante de leite obtida de látex de raiz de Jacaratia corumbensis O. kuntze foi caracterizada parcialmente e purificada, por precipitação fracionária com sulfato de amônio e cromatografia de troca de íon. Foram utilizadas cinco frações de sulfato de amônio (AS1 - 0-20%; AS2 - 20-40%; AS3 - 40-60%; AS4 - 60-80%; AS5 - 80-100%), a fração 40-60% (AS3) mostrou alta atividade coagulante com um fator de purificação de 1,2 vezes em relação ao extrato bruto. Esta fração foi aplicada em coluna Mono Q obtendo dois picos de proteína (p1 e p2), o p1 mostrou melhor atividade coagulante. O pH ótimo para o extrato bruto e parcialmente purificado foi 6,5 e 7,0, respectivamente. A atividade coagulante foi atingida a 55ºC para ambos os extratos, bruto e parcialmente purificado. A enzima foi inibida por ácido iodoacético que sugere que esta enzima é uma cisteína protease, com peso molecular de 33 kDa.