DNA polymorphism and total protein in mutants of Metarhizium anisopliae var. Anisopliae (Metsch.) Sorokin strain E9 Polimorfismo de DNA e proteína total em mutantes da linhagem E9 de Metarhizium anisopliae var. anisopliae (Metsch.) Sorokin

• Main Authors: Laurineide Lopes de Carvalho Freire, Ana Bolena Lima da Costa, Larissa Brandão Góes, Neiva Tinti de Oliveira
• Format: Article
• Language: English
• Published: Sociedade Brasileira de Microbiologia 2001-06-01
• Series: Brazilian Journal of Microbiology
• Subjects: Metarhizium anisopliae; mutantes; RAPD; proteína total; mutants; total protein
• Online Access: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822001000200004
• ISSN: 1517-8382; 1678-4405

Five mutants (MaE10, MaE27, MaE24, MaE41 e MaE49) of Metarhizium anisopliae wild strain E9 were analysed for DNA profile through the RAPD technique and for changes in total protein content by spectrophotometry, polyacrylamide gel electrophoresis and densitometry. The pattern of RAPD markers showed genetic polymorphism among the strains: out of twenty primers seven were selected, producing 113 bands. Forty seven bands were present in all strains (41.6% of monomorphic bands) and 66 showed polymorphism (58.4%). The mean coefficient of similarity among all strains was 0.75 (75%). The total protein content varied, staining in the interval of 6.0-8.0 µg/µl. The electrophoresis analysis, through zymogram and protein fraction profiles by densitometry, allowed the observation of seven bands for the wild strain E9 and five bands for the mutants MaE10, MaE27, MaE34, MaE41 and MaE49, evidence of variations in µg% among protein fractions. The RAPD technique was very sensitive to detect genetic differences between the wild type and the mutants obtained through gamma radiation. The total protein analysis also showed changes in quantity and pattern of bands after electrophoresis in the mutants compared to the wild type.<br>Foram analisados cinco mutantes MaE (MaE10, MaE27, MaE34, MaE41 e MaE49) da linhagem selvagem E9 de Metarhizium anisopliae var. anisopliae quanto ao perfil de DNA pela técnica de RAPD e também quanto ao conteúdo de proteína total por espectrometria e eletroforese em gel de poliacrilamida e densitometria. O padrão de marcadores de RAPD evidenciou polimorfismo nas amostras; dos 20 primers testados foram selecionados 7 que geraram 113 bandas. Deste total, 47 estavam presentes em todas as amostras (41.6% de bandas monomórficas) e 66 mostraram polimorfismo (58.4%). O coeficiente médio de similaridade foi de 75%. O conteúdo de proteína total variou de 6 a 8 µg/µl. O zimograma e perfís das frações de proteínas obtidos por densitometria revelaram 7 bandas para a linhagem selvagem E9 e 5 bandas para os mutantes com variações nos percentuais em µg% entre as frações de proteínas. A técnica de RAPD mostrou-se bastante sensível para detectar diferenças entre a linhagem selvagem e os mutantes obtidos por radiação gama. A análise de proteína total também evidenciou mudanças ocorridas na quantidade e no padrão de bandas nos mutantes em relação à linhagem selvagem.