Sexagem de embriões bovinos fecundados in vitro pela técnica de PCR multiplex

• Main Authors: Marcelo Rezende Luz, Yeda Fumie Watanabe, Jesus Aparecido Ferro, Maria Inês T. Ferro, Sônia Marli Singaretti de Mauro, Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima, Paulo Henrique Franceschini
• Format: Article
• Language: English
• Published: Universidade de São Paulo 2000-12-01
• Series: Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science
• Subjects: Sexagem; Embrido; Bovino; PCR
• Online Access: http://www.revistas.usp.br/bjvras/article/view/5861
• ISSN: 1413-9596; 1678-4456

Neste trabalho, a técnica de PCR ("polymerase chain reaction") foi utilizada para a sexagem de 92 embriões bovinos fertilizados in vitro. Os embriões originaram-se de fertilização in vitro de oócitos aspirados de ovários de fêmeas bovinas, provenientes de abatedouros comerciais. Os oócitos foram maturados, fertilizados e cultivados até o estádio de blastocisto. Os embriões foram lavados em solução de PBS, transferidos para tubos de polipropileno contendo água ultrapura, e imediatamente congelados a -196ºC. Os embriões foram descongelados sobre isopor contendo gelo picado e tratados com proteinase K. Para a reação de PCR, utilizaram-se alíquotas de 34 µl de cada tudo, onde foram acrescidos dois pares de primers, seqüência BC1.2 e seqüência satélite 1.715, desoxinucleotídeos, MgCl2, tampão PCR 10X, TaqDNA polimerase e água, em um volume final de 50 µl. As amostras foram amplificadas e a eletroforese realizada em gel de poliacrilamida a 8%. Os géis foram corados com solução de brometo de etídio e analisados em transiluminador de luz ultravioleta. Um índice de 93,47% de amplificação foi atingido, com 41 embriões (47,67%) machos e 45 (52,32%) embriões fêmeas. O uso de gel de poliacrilamida a 8% foi eficaz na separação de fragmentos de DNA muito próximos.